桥式扩增(Bridge amplification)是一种在基因组测序中常用的扩增技术,通过这种技术可以在微流控芯片上同时扩增成千上万个DNA片段。桥式扩增技术常应用于高通量测序平台,如Illumina平台。
桥式扩增技术的基本过程如下:
1. DNA片段制备:将待测DNA样本进行打断,得到短小的DNA片段。
2. 双链DNA合成:通过引物来指导DNA片段的合成,引物会与待测DNA片段的一端互补配对,然后通过DNA聚合酶的作用,合成双链DNA。
3. 固定引物:引物与DNA片段形成的双链DNA会被固定在微流控芯片上,通过化学修饰和高温处理来将DNA固定在芯片表面。
4. 聚合酶扩增:通过在芯片上引入聚合酶和碱基,利用聚合酶的扩增活性,在引物的引导下进行聚合酶链式反应,使DNA双链向两端扩增。
5. 拆解DNA链:将扩增的DNA链用碱性溶液进行分离,得到单链DNA。
6. 密度均匀化:通过对芯片表面的物理和化学处理,使DNA片段的分布更加均匀。
7. 碱基测序:将芯片放置于高通量测序仪中,通过碱基特异性荧光标记和激光扫描技术,测定DNA片段的碱基序列。
桥式扩增技术的优点是扩增效率高,可以同时扩增大量DNA片段,适用于高通量测序。此外,它还具有灵敏度高,准确性好等优点。由于桥式扩增技术需要在芯片上进行扩增,所以可以在非常小的空间内进行大规模并行扩增,大大提高了测序效率并降低了成本。桥式扩增技术还可以应用在基因组重测序、RNA测序、荟萃物子测序等领域。
总之,桥式扩增是一种在高通量测序平台中常用的扩增技术,能够实现大规模DNA片段的扩增,是现代基因组测序中不可或缺的一项关键技术。
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